pour donc fabriqué dans un microscope euh optimisés
alors c'est intéressant parce que en fait euh zeiss il existe toujours
schott il existe toujours
eux ils sont tous morts mais en fait avait euh il il a donc émis un certain nombre de de lois physiques qui sont eux très connu dans le domaine de l'optique
et alors pourquoi ça a marché ce truc-là parce que donc lui il s i y comprenait la physique
zeiss il était capable de fabriquer quelque chose
et monsieur schott qu est-ce qui savait fabriquer du verre
et euh tous les progrès eux ont été réalisés c'est justement dans l'assemblage de différentes lentilles
e contenant des des verres d'indice de réfraction différents
mettez donc de corriger donc euh un grand nombre de dps aberration alors maintenant ben schott existe toujours avec du verre y fabrique des fibres optiques etc et fabrique des microscopes entre autres choses
alors maintenant on arrive euh au microscope du vingt et unième siècle ou de la fin du xxe siècle
evidemment ça ressemble plus tellement à ce que l on a vu avant
on retrouve quand même euh euh une chose essentielle qui est euh l'objectif de microscope hein donc euh l'objectif du microscope
c'est ça en fait hein euh c'est là où y a le plus de l'ortie qui permettent donc de faire euh une image agrandie
euh bon voilà remplacé e d'éclairage euh euh éventuellement par le soleil avec un miroir qui réfléchissait e l'amiante le le la lumière du soleil vers l'échantillon par b une lampe ça c'est ça c'est assez euh immédiat
et puis en fait euh l'essentiel peut-être à un des trucs essentiel c'est que on a remplacé eux finalement
aux dires de tout le monde en parallèle donc avec euh le l'oculaire qui permet de faire des observations à l'oeil on a remplacé ça aussi par des caméras eux qui permettent de faire des images numériques s et ça ç'a été un facteur de progrès suivants gigantesque parce que il y a une sensibilité qui est très grande on a
image immédiatement et cette image après on va faire du traitement d'images
bon donc euh on peut dire que les physiciens ont effectivement contrat hum hum hum hum contribué finalement à aller sorte administre copie de ce point de vue-là hein parce que quand on est on est capable de fabriquer des d d d e
des des des caméras et ben c'est donc ça ça a un impact extrêmement important
pour les observations
bon là vous avez aussi donc euh euh ou une source qui va éclairer en fait euh donc l'échantillon avec eux non pas de la lumière blanche
mais de la lumière de s de certaines couleurs
et ça vous faire ça va permettre de faire ce qu on appelle de l imagerie de fluorescence je vous expliquer après eux ce que c'est
bon alors euh tout d'abord donc c'est comme ça que ça a commencé
l'imagerie microscopique une imagerie de la forme des objets morphologique
alors y a un petit problème qui est que euh la plupart des des échantillons des cellules biologiques et sont transparentes
et donc si on met imaginez donc des petits bouts de verre dans de l'eau bah on a du mal à voir les bouts de verre
alors il faut trouver quelque chose pour arriver à faire ressortir ces objets transparents
lors du point de vue physique
y vont quand même ce pouvoir se détacher heu du milieu ambiant par le fait qu'ils ont un indice de réfraction
un peu différents hein donc euh l indice de réfraction c'est est ce qui permet donc de de de dire que la déviation de de de la lumière quand elle passe d'un milieu à un autre donc elle est elle est déviée un angle d'autant plus grand que l'indice de réfraction est grand
alors euh l'eau est à trente-trois e les cellules c'est euh un trente-cinq un virgule quatre au au maximum donc mais donc il y a des techniques physiques qui permettent de mettre en évidence cette variation e indice de réfraction
alors ça c est les méthodes de marquage je veux dire euh physique et il existe des méthodes de marquage plus chimique en fait qui consiste à imbiber eux les objets par un colorant qui à faire que donc qui vont apparaître colorés sur un fond blanc hein alors le problème c'est que
pour que ça marche ce truc-là il faut faire rentrer le colorant dans les cellules donc il faut les trouées faut qu'elle soit morte en fait hein donc on voit ou on garde comme ça donc des e objet comme on dit fixés
fixer ça veut dire en principe dans l état où elle était quand elle était vivante mais donc euh elle bouchu
alors pour eux faire donc ces observations donc euh euh tout d'abord donc on va faire des innovations en lumière transmise donc voici la lampe et puis donc on passe au travers et là donc il y a ces objets là euh euh dick prise peu et fast ring quoi c'est ça ça en fait c'est des objets qui vont permettre de mettre en débat
dans ce le euh le le le l les variations de l'indice de réfraction
alors voici cette première méthode qui s'appelle le contraste de phase
donc en transmission sur des cellules de l'épithélium de mouches est-à-dire quand on onze gratte l'intérieur de la joue et puis on met ça sur une lamelle on met un petit peu d'eau non et puis on regarde et puis en fait bah on voit presque rien et donc le la méthode de contraste de phase qui est venu d ailleurs le prix nobel a à son inventeur niqué bon bah évidemment envoyer tes très bien les les sujets avec le noyau milieu
bon il y a une méthode qui a été aussi inventé donc par un physicien e français d'origine polonaise ne marquis hein qui s'appelle le contrat sainte différentiel et qui permet donc de voir aussi donc ces cellules on voit pas exactement la même chose on est pas sensible exactement la même chose mais donc euh hum hum on voit les choses-là
bon alors euh la la méthode de e d'imagerie par coloration donc ça c'est un truc qui existe depuis bien avant d'ailleurs le contraste de phase et de contraste interférences ciel hein donc là vous allez donc euh ici euh des œufs du son qui a été donc euh infecté par
euh le tri panneau hum eh bien donc en habit bord ce truc-là de bleu de meylan limousine ça c'est des colorants
on a tous entendu parler hein et ben donc les tripes à nos hommes donc euh prennent la coloration est comme ceci donc on limite très facilement en évidence
alors maintenant donc je passe à ce que je voulais donc le message que je voulais faire passer qui donc ce qui intéresse les biologistes c'est l'imagerie fonctionnelle comment marchent les molécules elles marchent avec des molécules euh comment marchent les cellules elles marchent avec des molécules et donc on va essayer donc de les détecter alors quelles sont les molécules d'intérêt bas
les protéines
hein c'est euh l'adn c'est des ions calcium qui sont impliqués donc dans plein de fonctionnement cellulaire etc donc on passe à l'imagerie moléculaire
alors cette imagerie moléculaire
sur quoi elle va reposer
elle doit reposer sur la encore un marquage
et le marquage qu'on va euh utilisé c'est par eux des molécules dites fluorescentes alors que je sais que des molécules fluorescentes ben c'est des molécules colorées hein et qui ont pour propriété
e d'émettre de la lumière une couleur différente de celle de l'éclairage
alors j'ai un exemple ici
donc voici donc euh euh une solution donc euh dha d'un colorant
hein et je vais l'éclairer avec de la lumière pertes donc vous voyez la lumière verte ici
et quand j'ai introduit donc cette lumière verte
dans le colorant et bascule on voit donc c'est une émission de lumière jaune
cette lumière jaune et est émise par les molécules de colorants qui sont éclairés par la lumière verte
quand
alors ce phénomène donc de de fluorescence
il est très intéressant
parce que il permet de détecter des molécules avec une grande sensibilité pourquoi
parce que en fait on a d'éclairage ambiant etc donc ça on est un petit peu éblouie par cet éclairage ambiant la plupart du temps il y a très peu de molécules la lumière de fluorescence elle est extrêmement peu intense par rapport à cette merde est clairement oui mais sur un filtre dans ce cas-là
on ne va pouvoir regarder que la lumière de fluorescence et éliminer la lumière de l'est clairement quelles couleurs différentes
et euh du coup la sensibilité élégante si un petit peu comme quand on regarde les étoiles la nuit
en plein jour on les voit pas parce qu on est ébloui par le soleil mais quand il fait noir bas on voit les étoiles et bah là c'est un petit poulet
et la sensibilité
et je vous dis donc très grande au point que actuellement on est capable de distinguer une seule molécule une molécule individuelle est déjà détectables eux grâce à sa fluorescence
alors ça ça va utiliser donc un autre composant donc dans ce microscope qui se trouvent ici qui s'appelle le cube séparateur alors cube parce que ça forme d'un cube
et séparateurs parce qu il va séparer effectivement euh les différentes lumières qui sont euh euh appliquer alors donc voici donc la source de lumière qui arrive ici
et là on veut mettre ce qu on appelle un miroir dix chroniques alors un miroir dix chroniques euh c'est quelque chose qui va en fait euh réfléchir
la lumière d'une certaine couleur et qui va
transmettre la lumière une autre couleur donc on envoie donc ce miroir eux ici qui éclaire l'échantillon
et puis on va récupérer
par le même chemin la lumière de fluorescence une autre couleur qui va être transmise par ce miroir ici et on va mettre un un filtre
qui va achever en fait d'éliminer euh la la lumière e jaune la plupart en fait pas
par ici donc euh le retour mais on a une partie qui hein et puis une petite partie qui qui est quand même transmises ben on l'arrête complètement donc avec ce filtre là donc ce qui permet de faire donc cette observation sur fond noir hein des molécules fluorescentes alors ça ça ça vous explique un petit peu donc euh euh le fait que si vous avez donc une une molécule
ce sont donc de la longueur d'onde de la couleur ici c'est le le violet là c'est euh le bleu là c'est le jaune e etc le le le rouge ici et bien vous allez donc avoir un pouvoir d'absorption
qui euh donc est piqué où vous allez entendre une couleur ici donc euh bah là ça serait plutôt on va dire euh quelque part vers le le le le le le jaune vert et ici vous allez avoir donc euh le
le l intensité qui est mise en fonction de la couleur et on voit qu'il y a un décalage entre les deux donc on on absorbe ici pour ce colorant la plutôt dans le bleu et puis donc la fluorescence va paraître dans le bleu vert jaune
voilà alors maintenant donc c'est ces molécules fluorescentes
qui maître de la couleur différente de celle de l'éclairage
il y en a plein
alors euh euh il y a donc un colorant par exemple le le d'api qui est une petite molécule qui se lie spécifiquement l'adn donc il y a une forme qui en fait euh s'adapte à la forme de certaines molécules qui constituent l'adn et donc il va se fixer comme ça il va permettre de révéler en quelque sorte les les les loyaux par ex
en plein dans lequel il y a l'adn
alors un truc qui utilisé aussi c'est d'utiliser des molécules fluorescentes combat que les chimistes vont coller en fait sur un anticorps alors un anticorps qu est ce que sébastien une protéine qui euh en fait va pouvoir être complémentaire d'une autre protéine hein et sans boiter dedans est ce que et s s se coller comme ça on va pouvoir comme ceci donc euh révélé
alors voici par exemple une image alors on voit trois couleurs ici à du rouge du vert et du bleu c'est une image en fausses couleurs en fait ces trois images ont été faites
hein avec des dés est clairement y est des observations donc de don d d d des bandes de de de de couleur différente et puis après donc là on superpose ces trois images de trois couleurs différentes pour bien faire apparaître
et leurs œufs leurs œufs leur complémentarité hein donc ici ben voilà le le les noyaux qui sont colorées par ce fameux dépit dont je vous ai parlé un petit peu avant et puis donc euh y a donc des structures qui s appelle des micros tubuleux au m'ont marqué par un anticorps spécifique donc ça c'est ce qui est en
anvers et puis euh en rouge donc il y a une protéine qui s appelle le lac teen en fait été marqué par euh donc euh ben une une substance e e qui s appelle la falot ying qui il y est donc un un un un colorant voici donc une image de deux fluorescent
oui
bon
alors ça donc c'est en ont obtenu donc on on on on mettant du du du du colorant hein euh donc en un biberon donc les les euh les cellules par ce colorant donc comme je l'ai dit la plupart du temps eh ben il faut il faut qu'elle soit morte pour les colorants puisse rentrer à l'intérieur de de de de la cellule
parfois on arrive donc à regarder des des des des molécules qui sont sur la membrane alors ça donc en principe c'est compatible avec la vie des cellules
mais euh donc euh pour l'intérieur donc c'est c'est c'est c'est compliqué de faire d'imagerie de fluorescence
avec des cellules vivant
alors il y a quelques temps
guère plus d'une vingtaine d'années il est apparu en fait de l'imagerie par des flottille fluorescentes donc dominique bourgeois dont je vous parlais tout à l'heure donc y y y parle de ça mais je je le dis parce que c'est vraiment quelque chose que
car révolutionner vraiment là les observations microscopiques ans en biologie
alors ça euh c'est suite aux observations donc deux de ces messieurs con d'ailleurs eu prix nobel de chimie hum hum en deux mille huit
et qui ont eux
découvert le fait que il y avait des des objets biologiques alors elle le premier qui a été observé comme ça société des oeufs des méduses une sorte de de méduse mais on a vu après que y a des coraux aussi hein qui sont fluorescents donc on les éclaire et ils émettent de la lumière d'une autre couleur
et ce qui est à l'origine donc de cette pure essence c'est est une protéine donc une protéine est un assemblage d'acides aminés enfin bon on est
on on est constituée de protéines quand même essentiellement de y en a des des millions de de sortes mais donc euh y en a certaines donc qui sont fluorescents donc elles ont une structure schématique qui apparaît ici
et alors ça c est extrêmement intéressant
parce que si la méduse elle est capable de fabriquer ces protéines
eh bien non
porte quel être vivant est capable de le faire aussi
comment ben en fait il faut le gers le modifier génétiquement hein donc euh ce qu on fait est que on on on va donc se débrouiller pour que le génome donc d'une e de d d'une cellule que l'on veut étudier
soit modifié
pour que quand ils fabriquent en fait une une une protéine d'intérêt est bas cette protéine soit pas euh la la la protéine naturelle mais la protéine sur lequel donc il y a un le lot de protéine fluorescente qui est attaché et donc quand on fabrique cette protéine on fabrique automatiquement donc euh euh quelque chose qui fait qu'elle va être
automatiquement fluorescentes hein bon alors ici donc il y a une image qui vous montre ce que ça peut être donc ces pauvres bêtes ont été certaine modifier et puis donc bah je sais pas quelle est la protéine qui eux qu on a rendu e fluorescente mets donc voilà quoi on les éclaire dans le noir elles deviennent vertes
alors
plus sérieux voilà donc une eu une image donc kim a été passée par un de mes collègues donc c'est c'est récent et vous voyez donc ici une image donc si en fausses couleurs hein comme vous comme tout le comme tout à l heure
sauf que donc ici eh bien on va voir euh ah ben le bleu donc c'est du tapis hein comme euh comme avant mais euh ici
en rouge
c'est latine qui a été marquée non pas par un colorant mais pars donc euh euh
euh le le la
atténue plus récentes qui s'appellerait des faits pourquoi parce que les œufs et les rouges en fait et puis donc envers la pac cylindre qui est une protéine qui intervient dans dans dans l adhésion qui a été marquée par la protéine euh j'fais alors j'fais pour green fluorescent de protéines parce que elle elle raison de verre
et voilà
alors donc de nos très nombreuses protéines peuvent être comme on dit euh euh clooney hein euh et donc permettent l'observation in vivo
du fonctionnement donc euh de de la cellule en regardant donc où est-ce que certaines protéines d'intérêt sont localisées comment est-ce qu'elle se déplace la nature de la cellule combien y en a etc
on peut même les photos détruire
donc plutôt que de les faire fluorescent donc on on les flash donc avec un rayonnement suffisamment intense et donc certaines d'entre elles vont pouvoir se euh ce ce ce photo détruire ce est donc ça permet de savoir ben qu'est-ce qui se passe quand euh la la la la protéine donc euh disparaît hein et donc c'est est une façon donc de voir quel est le leur rôle
dans le fonctionnement cellulaire
bon donc ce que c'est ce que je disais c'est vraiment une une révolution considérable
alors donc je vous renvoie encore une fois donc elle a la confiance de bourgeois et puis donc que la conférence à venir de m fall connais un qui va donc euh euh intervenir ou au mois de février qui va probablement vous parler aussi de ce genre de choses alors lui il est biologiste par contre donc il y aura un regard un petit peu différent peut-être dû
du mien
alors euh tout ça pour dire que pour faire une image
on peut bien mettre un appareil photo et puis donc avoir une image comme on dit plein champ
pour l'imagerie de fluorescence ce qu'on peut faire c'est en fait avoir un un faisceau laser pour focaliser sur un point
et on va détecter donc comme ça ben de lumière de fluorescence
et puis on balaye le faisceau laser hum hum hum on scanne finalement donc échantillons et on fait comme ça u u une image donc point par point
voilà alors
euh
ce qu'on peut faire le le le problème on en fait si si on si on on on voit faisceau laser et qu'on le focalisent eux en ont un point en fait si vous avez donc euh l'ensemble de la préparation qui est imbibé par du colorant la fluorescence i il y en a partout en fait hein donc on va détecter la fluorescence du point dans
intérêt sur lequel on focalise le laser mais on va détecter aussi euh euh de qui qui comme ceci alors comment est-ce qu'on peut en fait arrivé à sélectionner seulement la lumière qui est émise du point d'intérêt
hum on fait euh russie ce qu on appelle un un système qu'on focale alors voilà euh à quoi ça ressemble on va mettre le détecteur qui va être étiqueté à fluorescence derrière un petit trou
et ce petit trou comme on dit il est conjugué optique
du point focal qui se trouve ici
donc voilà le faisceau laser excita-t-elle avec la fluorescence qui provient de de tous ces endroits-là
si vous prenez donc de la lumière qui est émise du point où on a focalisé elle rentre parfaitement donc dans le trou ici on la détecte si vous prenez donc de la lumière qui
thémis d un point cd est en dehors ici ben en fait euh l'image par l'objectif qui se trouvent ici se formerait ailleurs et le résultat ce que y a juste une toute petite partie de la lumière qui passe par le trou et donc séparé comme ceci donc cette confo qualité avec donc euh l'objet euh euh le le le point focal permet donc
avoir des images qui sont donc euh alors oui ceci pour dire que pour faire l'image mais on balaye avec un miroir aussi long
donc le ballet la comparaison entre eu une image pour focal est une image plein en bas vous voyez donc évidemment c'est complètement flou eux ici et donc avec le cnes focale hum hum hum hum hum balayant donc on arrive à avoir ici donc eu une section optique comme on dit donc l'imagerie donc un plan
ok alors oui euh un p'tit mot sur eux les techniques non linéaires alors il y a une conference passez donc par benoît boulanger qui a parlé un petit peu donc cette technique d'optique non-linéaire alors qu'est-ce que c'est et il y en a plusieurs types alors je remets ici
euh la microscopie donc euh avec euh le faisceau laser donc on focalise la fluorescence qui vient de partout
et ce qui peut se passer c'est que
on peut plutôt que d'éclairer la lumière
le le le le le le le le colorant enfin la la la
les molécules d'intérêt avec la lumière d'une certaine couleur
on peut les éclairer avec une mia notre couleur
mais suffisamment intense pour que l'énergie nécessaire pour passer donc dans l état e e qui va donc rendre la molécule fluorescence
et ben c est apportée par deux photos en même temps donc la lumière se propage sous forme de de de de de grains d'énergie qui s appelle des des photos
si j'envoie à photons bleus j'y vais directement ici si plutôt que d'amener donc à photons bleus je prends deux photons rouges je avoir la même énergie qui va arriver donc euh
et qui va permettre d'arriver au même endroit et puis donc comme ceci donc on va voir la fluorescence qui va se produire après hein euh verte aussi
alors pour que ça se produise ce truc-là il faut de photons simultanément
donc il faut que en ai beaucoup au même endroit et beaucoup même endroit et bah c'est euh là où la lumière est focalisée donc voilà le le le le le technique donc ça ça ça a plein d'avantages donc la profondeur de champ est automatiquement euh euh réaliser et puis donc euh euh oh on va avoir une meilleure pénétration
aussi du rayonnement dans dans le milieu alors un exemple bon voilà donc quelque chose qui a été réalisé il y a quelques années par des gens de de mon laboratoire où il observez donc la vascularisation du cerveau du d'une une souris donc voilà la la bête donc si une souris e spécial e nu com comme on dit hein et donc on lui avait injecté donc un un colorant
qui était donc localisé à l'intérieur des vaisseaux sanguins hein ça rentrait pas dans dans les cellules et hum hum permettez
comme ceci donc de de voir comment c'était eux
c'était vascularisation voilà
alors euh d'autres optiques
d'autres méthodes optiques dites euh non linéaire
alors là c'est est un petit peu plus compliqué à à à comprendre la la lumière en fait ne va pas être absorbée par les molécules elle va simplement être diffusé hein mais euh alors la diffusion ben c'est euh euh vous envoyez donc de de de de lumière sur eux sur un un un objet ben il y a un petit peu
lumière de même couleur qui est donc renvoyé un petit peu partout mais ce qui peut se passer c'est que la lumière qui renvoyer
elle est pas la même couleur et euh de de la couleur correspondant à un photon ayant deux fois
l'énergie de ceux qui sont euh donc euh euh envoyer dessus
si ça peut être aussi
deux une énergie correspondant à celle de trois photons donc ça on appelle sa génération harmonique de
euh et sa génération l'amérique trois trois a cause de trois photos ici et ici à cause de photons et donc si les processus comme on dit qui sont non résolus il n y a pas d'absorption d'énergie par eux le la la matière mais on va être sensible à la structure de la matière à l'endroit où on focalise alors oui bien sûr comme c'est des processus
mon dit multi photonique ben il faut qu'il y ait beaucoup de photons e allons droit euh euh où ça se passe donc c'est à l'endroit où on focalise le faisceau laser
et voilà donc un exemple que je peux vous vous montrez un d une microscopie optique non linéaire non classé quelques uns chez nous qui s'intéressent à la structure de l'os donc c'est les coupes d'eau
hein et suivant que on regarde l'admiration l'harmonie de la génération harmonique trois mettons donc des des filtres adaptés donc on voit que donc euh on est sensible à des structures qui sont complètement différentes
voilà
alors là en en trois minutes je vous parlais donc euh d'a d une autre technique donc et pas mal de développer actuellement la microscopie e par optique adaptative alors qu'est-ce que c'est que ça
ben c'est le fait que quand on regarde à travers un un objet e in homogène alors ici c'est est un pare-brise sur lequel diane l'eau l'eau c'est transparent oui voilà mais quand on regarde à travers eux ce pare-brise mais en fait les objets sont sont flous apparaissent flou
parce que donc bah la lumière va être un petit peu donc diffuser voilà
alors ça
on le décrit en disant que si on envoie donc un faisceau lumineux directif quand il passe à travers ce milieu
transparent mais in homogène
on va avoir un faisceau lumineux qui est l histoire du
si on le réfléchie par un miroir qui est plan évidemment l'onde réfléchie elle est également euh d'histoire du ouais mais si je l'a réfléchie par un miroir qui est tordu comme il faut et ben je le redresse
voilà hein alors euh la forme doit être adapté d'où le mot de optique adaptative et alors tout le jeu merci d'avoir donc un miroir déformant câble
et voilà à quoi ça peut ressembler miroir déformant donc s y en a qui sont construits par une société euh ben euh du euh
de l'agglomération grenobloise
donc vous voyez ici donc eu une une membrane qui va être réfléchissante et puis on met des petits aimants on colle dessus ici on met des petits soleils oui on fait passer donc des courants
dans les solides et les aimants vont être plus ou moins attiré et donc ça va déformer le miroir comme il faut
et donc mon problème c'est de savoir comment est-ce qu on peut déformer le miroir donc euh comment savoir comment elle l l l lourdes optique va être déformé donc y a diététiques donc ça j'ai pas le temps de de de vous les analyser mais donc ça ça marche assez bien et je voudrais pour
terminé vous montrer donc euh ben un exemple de ce qu'on peut faire
alors euh c'est donc un film donc a été réalisée par eux ces physiciens donc euh physicien et biologiste eux américain l'a récemment alors betsy betsy que c'est intéressant parce que il a eu le prix nobel de chimie en deux mille quatorze pour la fameuse super résolution dont dominique bourgeois paris
alors je vais vous montrer un petit peu à quoi ça ressemble
y en a pour une minute
euh où est-ce que je fais
donc ils ont regardé comme ça ben les neurones
dans le cerveau dans un embryon de poisson zèbre alors le poisson zèbre il est sympa parce qu il est il y a peu près translucide donc ça permet facilement de voir quel intérieur et donc voilà donc euh les neurones ont été euh donc euh rendu fluorescence bah c'est encore une histoire de codage hein et
et donc quand on rentre dedans donc on arrive comme ceci avoir euh les cellules et leur interconnexion et voici ce qui se passe si y a pas l'optique adaptative vous voulez une image un peu floue
et quand on met en place donc l'optique adaptative dont je vais vous parler évidemment donc on améliore considérablement le contraste de deux l de l image
voilà
donc c'est pas pour ça qu'il a eu le prix nobel mais c'est pas mal quand même
v ous
coucou
voilà donc bah écoutez je je vais je vais euh à arrêter là j'avais juste eu une diapo ben j'arrive plus à mettre le truc en marche
pour dire que ben la microscopie c'est un le blé puis un outil puissant pour faire l'étude d'objets biologiques morphologie mais imagerie moléculaire
que y a plein de des de développements instrumentaux qui sont en cours donc les détecteurs c'est les systèmes d'optique adaptative dont je vais vous parler
e là-dedans derrière ça euh il faut comprendre un petit peu donc interaction lumière matière la photo physique moléculaire et
un truc fondamental pour faire signer j moléculaire sais
les les les marqueurs moléculaires qui font appel donc à la chimie la biochimie du et du génie génétique donc si interdisciplinaire tout ça merci beaucoup
si
alors vous lire euh du côté instrumental ou du côté e biologiques
instrumental passé c'est est un petit peu ce que je vous ai montré tout à l heure donc euh y a des choses au niveau donc des détecteurs des sources de lumière le syndic édition
voilà euh l'optique adaptative donc si quelque chose sur lequel donc euh euh les gens euh travail y compris d'ailleurs dans dans dans mon laboratoire hein euh et
essayez donc trouvé effectivement des des des des contrastes qui permettent de de voir des des des objets
sans marquage ça c'est c'est si intéressant parce que donc la la fluorescence c'est bien mais donc malgré quelque part c'est perturbant tiff
donc euh arrivé donc à avoir un un objet dans son état natif si toujours
mieux que que le reste quoi
ouais
ah ben euh la la la microscopie de fluorescence oui c est l outil de base de dinde un très grand nombre de
si c'est pas encore quelque chose qui est encore très répandue bruit il commence à exister quelques systèmes commerciaux mais mais mais pas tant que ça hein donc euh euh si on on travaille dessus et y compris d'ailleurs effectivement dans dans mon laboratoire
pour essayer donc à avoir des des informations qui soient
quantitativement c'est-à-dire que arrivé donc euh c'est finalement le physicien c'est la physique c'est est un petit peu une science exacte donc on aime bien avoir des nombres
qu'y soient eux aussi exacte que possible et pour arrivé donc à faire des mesures précises il faut donc arriver à développer des méthodologies qui eux sa franchise autant que possible des des artefacts ouais
il faut être physicien pour ça
oui c'est compliqué travail de recherche
puisque le défi eux
si vous insistez là-dessus faire votre conclusion
dernier mot donc oui ah bah il faut collaborer en fait hein alors c'est sûr que c'est c'est un peu compliqué parce que on a parlé le même langage enfin c'est c'est si banal de de devenir sur je hais ce genre de trucs mais enfin bon on on on s'y habitue et alors c'est vrai que on on a pas non plus forcément toujours les mêmes objectifs donc un physicien des fois il va être attiré par
aura un effet physique qui n'a aucun intérêt pour la biologie
mais euh je pense que donc nous euh donc euh hum hum hum on a quelques biologistes ou des gens qui ont été formés en biologie dans dans notre laboratoire et on a des des collaborations effectivement avec des biologistes et ça c est essentiel parce que vous voyez donc je vous ai parlé donc ces protéines fluorescentes on bat pour fabriquer donc euh euh des liés de deux protéines œufs d'oie
de deux cellules qui qui sont donc génétiquement modifiés pour faire genre de truc ça c'est sûr que bon faut avoir une expertise de biologistes euh quoi lorsque est intéressant aussi de discuter avec des biologistes c'est que c'est quand même euh euh souvent qui vont pouvoir nous dire quelles sont les questions intéressantes
qu est ce qu est-ce qui est pour eux donc est important donc à étudier parmi les les les les les les phénomènes biologiques que ca pourquoi regarder euh telles protéines plutôt que tel autre qui est impliqué dans e tel mécanisme
alors
alors tout à fait alors ben ce qui se passe c'est que euh euh alors il faut que je revienne à la microscopie qu'on focale tout à l'heure
donc le laser oh on va l'envoyer en fait euh sur euh un miroir aussi long mais â â â avant ça et bien on peut mettre en fait un un autre miroir qui va donc euh ben déformée
euh la le le règlement qui provient de du laser
qui va l'envoyer sur l'échantillon et puis en retour la lumière fluorescente elle doit aussi pouvoir être heu modifié par euh ce ce ce ce miroir et être également redressé quoi
donc ça joue en fait l éclairage est aussi donc euh à la réception
ajouter une fonctionnalité de fluorescence parce que ça modifie pas le comportement
vous voulez ou les propriétés physico-chimiques des éléments abaissez bien possible effectivement parce que si euh euh hum hum imagine bien que
si cette protéine donc euh et elle a ce ce boulet fluorescent e derrière elle bon va être un peu plus grosse donc euh à la limite elle va avoir un peu plus de temps à de avoir un peu plus de temps à se déplacer mais surtout éventuellement euh
les protéines elles sont prévues pour euh en fait euh s'emboiter les unes dans les autres et si effectivement ce boulet se trouve à l'endroit où elle doit s'accrocher avec une autre évidemment ça veut dire que elle elle va pas fonctionner normalement en quoi donc ben je dirais si c'est le boulot des des biologistes de deviner
euh comment est-ce qu faut modifier la la protéine pour eux que le f le le boulet fluorescent soit e greffer à un endroit qui ne gêne pas et puis après ben faut faire aussi des tests pour savoir si
la la viabilité des cellules a été ou pas modifié mais oui si c'est sur que oui
ouais
ben ça ça a avoir c'est veut dire que effectivement quand on envoie de la lumière sur un miroir qui est courbe
et ben euh ce qu'on va observer va être une image déformée
bien sûr alors impression elle arrivé si si si euh hum hum hum hum hum réfléchit donc euh euh cette lumière
par un miroir de forme complémentaires ben on n'imagine que du coup à pouvoir euh euh redresser l'image et y avoir quelque chose qui euh n'est plus
ouais
je voudrais
je voudrais je je me pose la question si
traitement de traitement d'image je suppose que pour adapter en temps réel
le miroir
coup traitement d'image oui alors il y a plusieurs techniques eux qui sont eux u utilisé mais y en a une par exemple qui va consister à analyser l'image et puis a à mesurer son son contraste
et ben on on on veut optimiser la la forme du miroir de de telle sorte que le contrat soit maximum sachant que si l'image est floue son contraste baisse alors il y a il y a plein d'indicateurs possibles en fait pour eux euh caractériser la qualité de dg une image ceci en est un œil il y en a d'autres
et donc euh où il faut réfléchir non non
dans le le l algorithme d optimisation en fait du du miroir parce que elle le miroir donc on ski à faire c'est que hum donc on on on va le déformer un peu et puis euh donc l'image va s'améliorer ou pas euh dans ce cas-là on revient en arrière sierra mais évidemment quelle déformation on va lui donner
de façon à ce que le processus e converge on peut pas faire n'importe quoi donc là il faut agir
ce qui
oui bien sûr
non non mais enfin je j un exemple chez nous il y a des gens qui ont eux
et tu eus étudier ce qui s appelait le le choc thermique
alors qu'est-ce que c'est que le choc thermique c'est euh une cellule normalement elle vit à trente-sept degrés
bon on lui impose de tout d'un coup là euh de se trouver dans un environnement à plus de quarante degrés
si elle dure trop longtemps le mot et bien sûr
mais il y a une période transitoire dans lequel elle va s'adapter est ce que les gens ont vu c'est que euh dans ce cas-là donc euh y avait une certaine protéine que les biologistes avaient identifié
qui euh donc euh va se soumettre à à ce à ce polymérisation en fait sous l'effet de chocs thermiques et est donc de se localiser à un certain endroit de la sub donc c est un exemple des expériences ont été faites sur des cellules vivantes
donc est de voir donc comment les molécules donc euh les protéines évolué quand on
on agissait sur eux sur la cellule vivante
découverte
bien sûr on a eu plusieurs conférences
ça va ça va relancer
type de mesures
chose intéressante au ciel
oui
alors euh il y a un truc qui s'appelle les boîtes quantiques alors que le lait alors les boîtes quantiques est-ce que c'est en fait ce sont des nanoparticules un typiquement ça fait euh euh dis nanomètres de diamètre donc si un composé inorganique en fait hein donc c'est un truc semi-conducteurs on va dire et
euh ce truc truc-là fluor
bon alors ça ça les avantages parce que euh ça
ça blanchit très peu le problème des des des molécules organiques c'est que quand on les éclaire pendant longtemps
l e elles disparaissent pour elle elle se casse hein de la même façon que bon si on prend donc euh un un tissu euh bah au soleil on sait qui passe à ses couleurs ça fait dix c'est dû au fait que donc euh des des des molécules de colorants sont sont cassés par euh par le rayonnement bout d'un certain temps alors c'est c'est ces boîtes quantiques elle donc euh
oh euh
blonds blanchissent très peu donc s s s un truc était donc pas mal intéressé et en plus on peut euh en faire euh suivant la taille qu'elles ont elle va avoir un un un un spectre de fluorescence qui est très différent donc on peut en fait euh un un le milieu donc avec eux
une collection de de ces boîtes quantiques de différentes tailles qui vont être greffé sur quelque chose qui va permettre de de les accrocher spécifiquement à différents endroits et avoir donc euh euh eu une image avec plein de de de de molécules différentes qui ont été eux comme ceci e observer
voilà
dernière question
nous remercions
donc